hum0490-v1リリース情報

Progestin-primed ovarian stimulation（PPOS）法を用いた調節卵巣刺激下でプロゲスチン製剤が卵胞発育・卵子の成熟過程に及ぼす影響に関する検討

目的

生殖補助医療において、プロゲスチン製剤（合成プロゲステロン）を排卵抑制剤として用いるProgestin-primed ovarian stimulation（PPOS）法が、調節卵巣刺激法の一つとして普及している。しかし、プロゲスチン製剤が卵胞液、顆粒膜細胞、卵丘細胞などで発現する遺伝子や蛋白に与える影響は十分に評価されていない。本研究はPPOS法で使用されるプロゲスチン製剤が、卵胞発育・卵子の成熟過程に及ぼす影響を、生殖補助医療における採卵及び顕微授精の過程で副次的に得られるヒト卵胞液、卵巣顆粒膜細胞、卵丘細胞、血液検査の残余検体などを用いて従来法と比較検討すること、また、基礎実験の結果や臨床成績を加味して最適なPPOS法を確立すること、を目的としている。

研究方法

層壁顆粒膜細胞（mural granulosa cells：mGC）を採取後洗浄し、Bambanker培地にて凍結保存（-80℃）した。融解後、細胞数を標準化した上でPPOS実施群、従来の排卵誘発法のGnRH-ant実施群、それぞれを混合して解析に用いた。DNase処理後、MidiMACS™ Starting Kit（Miltenyi Biotec社）を用いたソーティング（Dead Cell Removal Kit, Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany）により死細胞を除去し、Chromium Next GEM Single Cell V(D)J Reagent Kitsを用いて行いてライブラリー調整後、DNBSEQ-G400シーケンサーを用いてsingle cell RNA-seqを実施した。

対象

正常卵巣機能を有する不妊症16症例（PPOS実施群8症例、GnRH-ant実施群 8症例）のmGC

URL

N/A

研究代表者

伴田 美佳

所属機関

大阪大学大学院医学系研究科 産科学婦人科学講座

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